產(chǎn)品介紹:

雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒為檢測基因的表達量提供有效的手段，在DLR檢測中，螢火蟲螢光素酶（Firefly luciferase）和海腎螢光素酶（Renilla luciferase）的活性可在單個樣品中依次檢測。 先以螢光素（Luciferin）為底物來檢測螢火蟲螢光素酶的活性，然后加入抑制螢火蟲螢光素酶催化的物質(zhì)，同時加入腔腸素（Coelenterazine）檢測海腎螢光素酶的活性，實現(xiàn)雙螢光素酶報告基因檢測。通過螢光素酶和其底物這一生物發(fā)光體系，可以非常靈敏、高效地檢測基因的表達。通常把感興趣基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件或5'啟動子區(qū)克隆在Luciferase的上游，或把3'- UTR區(qū)克隆在Luciferase的下游，構(gòu)建成報告基因（Reporter gene）質(zhì)粒，然后轉(zhuǎn)染細胞，用適當藥物等處理細胞后裂解細胞，通過檢測螢光素酶活性的高低來判斷藥物處理等對目的基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。海腎螢光素酶更多地 被用作檢測轉(zhuǎn)染效率的內(nèi)參，以消除細胞數(shù)量和轉(zhuǎn)染效率的差異。

螢火蟲螢光素酶是一種分子量約為61kDa的蛋白，在ATP、鎂離子和氧氣存在的條件下，可以催化螢光素生成氧化螢光素（Oxyluciferin），在螢光素被氧化的過程中，會產(chǎn)生光信號。海腎螢光素酶是一種分子量約為36kDa的蛋白，在氧氣存在的條件下，可以催化腔腸素氧化成腸酰胺（Coelenteramide），在腔腸素氧化的過程中也會產(chǎn)生光信號。本試劑盒的光信號可以通過化學(xué)發(fā)光儀、酶標儀或液閃測定儀進行測定。該試劑盒具有檢測迅速、靈敏度高、檢測范圍廣，無細胞內(nèi)源活性干擾等特點。