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TTC染色原理的介紹

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TTC染色是TTC和活細(xì)胞線粒體內(nèi)的琥珀酸脫氫酶反應(yīng),生成紅色的甲月贊,用來(lái)表示細(xì)胞的活力。配制多為2%,染色要避光,37度條件下,它是評(píng)價(jià)腦缺血損傷常用的指標(biāo)。

    TTC染色原理

    TTC(2,3,5—氯化三苯基四氮唑)是脂溶性光敏感復(fù)合物,1894年首次合成用來(lái)檢測(cè)種子的生存能力,1958年開始用來(lái)染色檢測(cè)哺乳動(dòng)物組織的缺血梗塞。它是呼吸鏈中吡啶—核苷結(jié)構(gòu)酶系統(tǒng)的質(zhì)子受體,與正常組織中的脫氫酶反應(yīng)而呈紅色,而缺血組織內(nèi)脫氫酶活性下降,不能反應(yīng),故不會(huì)產(chǎn)生變化呈蒼白。

    TTC可以被活細(xì)胞中的具有還原活性的酶(好像主要是琥珀酸脫氫酶)還原生成粉紅色的還原產(chǎn)物,所以活組織部分呈現(xiàn)粉紅色,而死亡的細(xì)胞的還原酶的活力已經(jīng)消失,因此TTC不能被還原,所以死亡的組織呈現(xiàn)白色。

    對(duì)于種子或者植物組織來(lái)說(shuō),染色結(jié)果為活組織被染成不同程度的紅色,死組織或者無(wú)生命力的組織不著色。對(duì)于缺血梗塞組織,因組織壞死脫氫酶活力喪失呈現(xiàn)蒼白色,而正常組織呈深紅色。TTC常用的染色濃度為2%(w/v),也可根據(jù)組織類型做濃度的適當(dāng)調(diào)整。

    TTC染色步驟

    1、取腦:可麻醉后直接取腦或經(jīng)生理鹽水灌注后取腦。因?yàn)槟X組織未用多聚甲醛固定,所以較軟,取腦時(shí)更應(yīng)仔細(xì),保持大腦的完整性。

    2、-20度冰箱中速凍20分鐘左右,便于切片。

    3、切片:一般切成5-6片,每隔2mm切一片。第一刀在腦前極與視交叉連線中點(diǎn)處;第二刀在視交叉部位;第三刀在漏斗柄部位;第四刀在漏斗柄與后葉尾極之間。如果需計(jì)算面積的話,應(yīng)切得均勻或用專門的腦槽。

    4、將切片置于TTC中,常規(guī)濃度為2%,也有用1%或更低濃度的。

    5、用錫箔紙蓋住后,放入37C溫箱15~30min,不時(shí)翻動(dòng)腦片,使均勻接觸到染色液。

    6、染色后效果:為皮層下梗死。

    TTC染液是一種脂溶性光敏感復(fù)合物,用TTC染色即可用來(lái)檢測(cè)種子的生存能力,也可用來(lái)檢測(cè)哺乳動(dòng)物組織的缺血梗塞。檢測(cè)機(jī)制在于TTC本身可作為一種氧化還原指示劑,活細(xì)胞內(nèi)的脫氫酶(尤其是線粒體內(nèi)的琥珀酸脫氫酶)可以將TTC還原為紅色甲臢化合物TPF(1,3,5-triphenylformazan)。

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